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犬狂犬病毒抗體檢測(cè)試劑盒
使用說明書
【介紹】
狂犬病毒（Rabies virus, RBV）抗體檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)貓、犬等動(dòng)物血清中的狂犬病毒抗體，用于評(píng)估狂犬病毒疫苗免疫狀況。
本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被狂犬病毒抗原。在試驗(yàn)中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)的抗狂犬病毒單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測(cè)定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
【組份】
| 1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1/2塊 | 7 | 終止液 | 11ml |
| 2 | 酶結(jié)合物 | 11/22ml | 8 | 陰性對(duì)照 | 1/2ml |
| 3 | 10倍濃縮洗滌液 | 100ml | 9 | 陽性對(duì)照 | 0.5/1ml |
| 4 | 樣本稀釋液 | 50ml | 10 | 封板膜 | 2/4張 |
| 5 | 顯色液 | 11/22ml | |||
| 6 | 說明書 | 1份 |
【需自備的設(shè)備及試劑】
1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶標(biāo)儀。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機(jī)。
【樣品制備】
取動(dòng)物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【洗滌液的準(zhǔn)備】
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
【注意事項(xiàng)】
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。
2. 不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對(duì)皮膚和眼可能有刺激性，使用時(shí)應(yīng)該注意防護(hù)。
4. TMB（顯色液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測(cè)板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。
8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用；
【操作步驟】
1. 每次試驗(yàn)均設(shè)置空白孔1孔、陽性對(duì)照1孔、陰性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照、陽性對(duì)照直接取100ul/孔加入孔內(nèi)；
2. 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi)，之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請(qǐng)勿混用）；
3. 蓋上封板膜（可按實(shí)際需要自行裁剪），置37℃溫育60分鐘。
4. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)4-6次，最后在干凈吸水紙上拍干。
5. 除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。
6. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌4-6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。
7. 每孔加顯色液100µl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
8. 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。
【結(jié)果判定】
以空白對(duì)照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。
試驗(yàn)成立的條件是：
N值>0.5、同時(shí)陽性對(duì)照(P)阻斷率>50%；
計(jì)算方法：
PI (阻斷率)= 1 —（樣品OD值 / 陰性O(shè)D均值）
陰陽性判斷：
PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性；
PI≤40%則判斷為陰性。
注：（PI=40%相當(dāng)于抗體滴定度0.5IU/ml)
【有效期】
貯存方法： 2 - 8ºC下貯存。
有效期： 12個(gè)月。
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