CCK-8試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所(Dojindo)開發(fā)的四唑鹽——WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-MethoxyPMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。 CCK-8試劑盒的檢測(cè)步驟：
1、向各孔中加入100μl細(xì)胞懸液。
2、在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。
3、向各孔中加入各濃度的待測(cè)溶液10μl。
4、37℃下孵育。
5、向各孔中加入10μl的CCK-8溶液。
6、37℃下孵育1-4小時(shí)。
7、測(cè)定450nm處的OD值。
CCK-8試劑盒的使用注意事項(xiàng)：
(1)使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。
(2)建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預(yù)培養(yǎng)。
(3)使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。
(4)如果待測(cè)溶液有還原性，測(cè)定不含細(xì)胞，但含有CCK-8的待測(cè)溶液在450nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100μl培養(yǎng)基和10μlCCK-8進(jìn)行檢測(cè)。
(5)白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
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