ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
1.保持每次加樣的兩步要有太大的差異，所以有條件的應(yīng)該考慮使用排槍。
2.槍內(nèi)有氣泡應(yīng)該先快速打空槍，將氣泡排出。
3.板內(nèi)有氣泡可以考慮用空槍將其吸出，不過(guò)小心不能碰到底板！
4.盡量用排槍，做好筆記，一次做完，避免下次還要做標(biāo)準(zhǔn)。
5.加完現(xiàn)色液后，放入一個(gè)可推拉的抽屜內(nèi)，就可以避光振蕩了。
操作注意：
1.吸取樣品時(shí)，加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確。
2.不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來(lái)，加樣不準(zhǔn)確。
其實(shí)給ELISA試劑盒樣本加樣并不是什么大問(wèn)題，很多事情往往是被操作者們給想復(fù)雜了，只要有足夠的耐心與認(rèn)真，就一定可以做出漂亮的實(shí)驗(yàn)！
在ELISA試劑盒試驗(yàn)中的各項(xiàng)操作細(xì)節(jié)有許多，如盡量少用排槍、勤換槍頭，細(xì)節(jié)決定成敗，這對(duì)于試驗(yàn)室科研工作者來(lái)說(shuō)也是如此。加樣時(shí)由低濃度向高濃度加，由于這樣能夠削減跳孔的幾率。而整個(gè)試驗(yàn)的*后要害便是成果的處理辦法了，那么在在今日的技術(shù)文章中。
為您帶來(lái)的是ELISA試劑盒成果分析辦法:
1：ELISA試驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度規(guī)范品的均勻OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
2：均勻OD值減去空白孔的OD值。
3：制造規(guī)范曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，規(guī)范品的濃度為Y軸，運(yùn)用作圖軟件得出一個(gè)適宜的計(jì)算辦法。主張運(yùn)用適宜的軟件來(lái)作圖，比方CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出許多種辦法(比方直線、半對(duì)數(shù)、對(duì)數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中挑選一條*適宜的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)符合，能夠?qū)⒁?guī)范品的濃度作為未知數(shù)，將對(duì)應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出規(guī)范品的濃度，得到的成果應(yīng)該與實(shí)際濃度很挨近(+/-10%)。挑選擬合度的那條曲線。
如果呈現(xiàn)規(guī)范曲線的線性欠好，或平行性欠好(雙孔對(duì)照孔的OD值不同很大)，或呈現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間彼此污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作、添加樣品或其它試劑時(shí)操作的辦法不對(duì)、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒(méi)有密封好使得水分蒸騰、酶標(biāo)板孔問(wèn)參加的試劑量不同，相對(duì)應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請(qǐng)當(dāng)心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請(qǐng)當(dāng)心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、添加試劑時(shí)請(qǐng)懸空滴入，牢記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要替換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、運(yùn)用已校正過(guò)的微量加樣器，如將次參加液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將今后槍頭上留有的液體也滴下，以保證參加液體體積的一致性。
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