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血磷濃度檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
規(guī)格：100T/96S
測(cè)定意義：
血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷， 以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以 mg/dL表 示時(shí)，二者的乘積( [Ca] × [P] )為 30~40 。當(dāng)( [Ca] × [P] )>40 ，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨 組織；若( [Ca] × [P] )<35 則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量 的相對(duì)穩(wěn)定依賴(lài)于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。上述平衡受到維生素 D3 、 甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。
測(cè)定原理：
去除血清中有機(jī)磷后，無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色，在620nm 有光吸收；通過(guò)測(cè)定620nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。 試劑組成和配置：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。 臨用前配制，依次加入11mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充
分混合。
標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1 支，1mmol/L無(wú)機(jī)磷，4℃保存。
血磷濃度測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620nm ，蒸餾水調(diào)零。
2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。
3. 血清預(yù)處理： 吸取50μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm ，離心10min ，取上清液，待 測(cè)。
4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL蒸餾水，50μL試劑一，100μL試劑 三，混勻后靜置10min ，于620nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液，50μL試劑一，100μL試劑 三，混勻后靜置10min ，于620nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
6. 測(cè)定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μL上清液，50μL試劑一，100μL試劑
三，混勻后靜置10min ，于620nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
血磷濃度計(jì)算：
血磷含量 ( mmol/dL) =[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]× 樣品稀釋倍數(shù) ×V 樣總=2×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)： (50μL血清+950μL試劑一) ÷50μL血清=20。
注意事項(xiàng)：
1 、 試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！
2 、 測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血 清無(wú)機(jī)磷含量增高。
3 、 最低檢出限為0. 1mmol/L。
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