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EF21A\J1 2016-01版
孔雀石綠
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物孔雀石綠將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗孔雀石綠抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物孔雀石綠的含量成負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物孔雀石綠的含量。
二、試劑盒特性
水樣 ······································· 0.1ppb
水產(chǎn)品 ······································· 0.5ppb
顯性孔雀石綠 ································· 100%
隱性孔雀石綠 ································ 0.1%
結(jié) 晶 紫 ···································· 95%
隱性結(jié)晶紫 ·································· 0.1%
水樣、水產(chǎn)品 ···························· 80%~110%
板內(nèi)、板間變異系數(shù)≤12%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 10倍濃縮標準液×6瓶 （1ml/瓶、黑色帽） | 0ppb | 0.5ppb |
1.5ppb | 4.5ppb | ||
13.5ppb | 40.5ppb | ||
3 | 酶標記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 氧化劑 | 3ml | 白色帽 |
10 | 4X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、恒溫箱
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：乙腈、二氯甲烷、無水硫酸鈉、正己烷
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 樣品提取液
乙腈-二氯甲烷混合溶液：
V乙腈-V二氯甲烷 = 4 : 1， 取40ml乙腈，
再加入10ml二氯甲烷，混勻后使用。
配液2 樣品復溶液
將4X濃縮復溶液用去離子水按1：3稀釋
（1份4×濃縮復溶液+3份去離子水），或按所
需用量配制。
取50µl清澈水樣樣直接測定（如果水樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清澈樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
注：此方法所得到的結(jié)果為孔雀石綠；隱性孔雀石綠；結(jié)晶紫；隱性結(jié)晶紫的總量。
六、 酶標免疫分析程序:
配液2：
配制孔雀石綠標準液：取一定量的10倍濃縮
標準液用樣品復溶液10倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用，
具體如下：
標準液6：配制4.05ppb標準液--取50ul 40.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液5：配制1.35ppb標準液--取50ul 13.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液4：配制0.45ppb標準液--取50ul 4.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液3：配制0.15ppb標準液--取50ul 1.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液2：配制0.05ppb標準液--取50ul 0.5ppb標準液加450ul樣品復溶液混勻；
標準液1：配制 0ppb標準液--取50ul 0ppb標
準液加450ul樣品復溶液混勻；
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含孔雀石綠量成負相關。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；
0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以孔雀石綠標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
