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EF33B\J2 2016-01版
β-興奮類
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的β-興奮類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗β-興奮類藥抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含β-興奮類藥物的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)β-興奮類藥物的含量。
二、試劑盒特性
豬 尿 ·········································· 0.3ppb
豬 肉 ·········································· 0.6ppb
克倫特羅（Clenbuterol）························· 100%
西馬特羅（Cimaterol） ······················· <4%
溴布特羅（Brombuterol） ······················ 60%
馬布特羅（Mabuterol） ························· 108%
班布特羅（Bambuterol） ······················ <5%
氯丙那林（Clorprenaline） ····················· <1%
沙丁胺醇（Salbutamol） ························· 75%
特布他林（Terbutaline ） ······················ 25%
噴布特羅（Penbutolol） ························· 19%
妥布特羅（Tulobuterol） ························ 23%
菲諾特羅（Fenoterol） ····························<0.1%
萊克多巴胺（Ractopamine） ······················ <0.1%
豬 尿、豬 肉 ···························· 90%±30%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔，一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 （1ml/瓶） | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 10ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 5X樣本提取液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器：酶標(biāo)儀、離心機、恒溫箱、打印機
微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道 30～300 µl
試 劑：*、濃鹽酸
五、樣本前處理步驟
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 0.2M 鹽酸
取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。
配液2 1M *
稱取4g *固體加去離子水定溶至
100ml。
配液3 樣本提取液
5X樣本提取液用去離子水1：4稀釋。
（a）豬肉樣本的處理方法
樣本稀釋倍數(shù)： 4倍
（b）豬尿樣本的處理方法
取20µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定
要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮
尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含β-興奮量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.1ppb為1.816；0.3ppb為1.415；0.9ppb為0.74；2.7ppb為0.313；8.1ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb～8.1ppb；樣本2的濃度范圍是0.3ppb～0.9ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮類藥物實際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光率（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以β-興奮標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中β-興奮類藥物實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實驗結(jié)果，請放心使用。
